多能干细胞专用无酶细胞解离液

一、产品信息

无酶细胞解离液（Enzyme Free Cell Dissociation Solution）专为人体多能干细胞（hPSC）设计，核心优势为无酶温和解离，避免传统酶解损伤。其不添酶类，保护细胞活性、维持遗传物质稳定。控孵育时间可获传代用细胞小团块或单细胞悬液，适配hPSC传代、冻存、分化等实验，是干细胞研究理想选择。

二、产品组分及存储条件

三、使用说明

1.传代时机的选择（满足以下条件之一即可传代）：

a)细胞汇合度达85%左右，一般情况下每4-5天传代一次，即使克隆团较小、汇合度不足，也建议不要连续培养超过7天。

b)细胞汇合度较低，但干细胞集落过大，中央细胞生长不良。

2.传代比例：

可根据细胞生长状态和实验需要，按细胞量在1：6-1：12进行传代。如果细胞正常，克隆团汇合度85%，大小均匀，建议按照1：12进行传代。如果密度偏低，则可增加细胞量；密度偏高，则降低细胞量。

3.将Matrigel/VTN包被的六孔板，提前放置生物安全柜中恢复至室温（~25℃)。

4.根据传代接种的孔数准备2mL/孔的多能干细胞培养基，加入Rocki至终浓度10uM，恢复至室温（~25℃)。

5.将培养板中细胞培养基吸弃，加入1mL/孔的DPBS（不含钙镁），轻轻摇晃并吸弃。加入1mL/孔室温预热的Doracell无酶消化液使溶液完全覆盖孔底。置于37℃培养箱中孵育5min。

TIPS：

（1）消化4-5分钟后镜下观察细胞变化，当大部分细胞变亮变圆，且细胞尚未脱离基质或漂起时即可终止消化，若大部分细胞仍未变亮，则需要延长消化时间。

（2）保持六孔板与培养箱金属隔板直接接触，使六孔板受热均匀，不要叠放。

（3）消化时间与包被材料和细胞状态有关，出现1-2分钟的偏差属于正常现象，需要实验人员在前几次实验中进行优化。

6.此时可以根据细胞状态选择下列两种传代方式之一：

6.1若有相当数量细胞已呈漂浮状态，可用培液终止消化，离心后传代或冻存：

6.1.1轻轻拍打6孔板，使消化后的克隆脱离皿底，用5mL移液管将细胞悬液收集到装有4倍于消化液体积的hPSC培养基的离心管中；

6.1.2离心，将细胞悬液置于15ml离心管中离心，200g，3min；

6.1.3吸弃上清，加入冻存液冻存，或用1mlRocki+hPSC完全培养基重悬细胞；

6.1.4接种，吸弃六孔板中的Matrigel/VTN溶液，加入预温的Rocki+hiPSC完全培养基2ml/孔,将细胞悬液以实验所需的比例接种至孔板中；

6.2若细胞主体仍贴壁，可直接吸弃消化液后传代或冻存：

6.2.1将培养容器转移至操作台内，避免震荡与磕碰；

6.2.2略微倾斜孔板，直接吸弃消化液。加入冻存液冻存，或1mlRocki+hPSC完全培养基重悬细胞；

6.2.3接种，吸弃六孔板中的Matrigel/VTN溶液，加入预温的Rocki+hiPSC完全培养基2ml/孔,将细胞悬液以实验所需的比例接种至孔板中；

7.水平十字摇匀六孔板三次，置于37℃，5%CO2浓度，饱和湿度的培养箱中，再次水平十字摇匀六孔板三次，培养过夜。

8.18-24小时后更换新hiPSC完全培养基，之后每隔一天换一次液，4-5天后继续传代或冻存。

四、订购信息

*将基础培养基和添加物混合均匀配置成完全培养基，可在2℃-8℃中存储，4周内用完。